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干貨丨抗體標記經(jīng)驗總結(jié)

更新時間:2022-05-27  |  點擊率:1956

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導讀:

熒光抗體標記技術(shù)是將熒光標記物以化學方法與特異性抗體共價結(jié)合,在抗體-熒光結(jié)合物與對應的抗原特異結(jié)合后,通過熒光顯微鏡等儀器設備觀察熒光標記物的信號情況,從而實現(xiàn)對待檢物的定位、定性或定量檢測。在實驗過程中,我們經(jīng)常會遇到如何選擇熒光標記物、多重熒光檢測時如何進行熒光標記物的搭配等問題。為此,小編特意采訪了Bioss抗體標記專家,讓我們一起聽聽專家的分享吧~

 

 

 

Q1:市面上的熒光標記物很多,如何判斷一個熒光標記物是否適合標記抗體呢?

作為標記的熒光標記物應符合以下要求:

 具有能與抗體形成共價鍵的化學基團,且與抗體結(jié)合后不易解離,同時未結(jié)合的熒光標記物及其降解產(chǎn)物易于清除;
 熒光效率高,在與抗體結(jié)合后仍能保持較高的熒光效率;
● 與抗體結(jié)合后不影響抗體原有的生化與免疫性質(zhì);
● 標記方法簡單,安全無毒;
● 與抗體結(jié)合穩(wěn)定,終產(chǎn)物易于保存。

 

 

 

Q2:在Bioss實驗室,經(jīng)常用到哪些熒光標記物,可以推薦一些嗎?







Bioss實驗室可以提供基于29種標記方式的標記抗體產(chǎn)品及標記服務,比較常用的有:

 小分子熒光素:FITC, Rhodamin
 Cy系列:Cy3, Cy5, Cy5.5, Cy7
● Alexa Fluor系列:
AF350, AF488, AF555, AF594, AF647, AF680, AF750
 熒光蛋白:PE, APC, PerCP
● 熒光串聯(lián)標記:PE-Cy, PerCP-Cy等

 

 

 

Q3:以上提到的熒光標記物,經(jīng)常會用于哪些實驗呢?

下表匯總了不同種類熒光標記物的適用實驗類型,供大家參考

工作簿1.jpg

 

 

 

 

Q4:對于有多重熒光檢測需求的實驗應用,比如多重免疫熒光檢測和流式細胞術(shù)等,在做多重熒光染色方案設計時,需要遵循哪些原則?

在Bioss實驗室,我們做多重熒光檢測設計實驗時,一般會遵循以下原則:

● 確認檢測設備的參數(shù):熒光顯微鏡通常是一個鹵素光源配若干個濾光片,流式細胞儀通常是2-3個激光管配若干個檢測通道;

 在可選范圍內(nèi)選擇更強的熒光,常用熒光及其強弱程度排序: PE>APC>PE-Cy5>PE-Cy5.5/PerCP-Cy5.5>FITC;  
 細胞表面蛋白可以選擇PE等熒光蛋白,需要進入到細胞內(nèi)的檢測,盡量選擇小分子熒光素;  
● 對熒光多重染色,熒光素與抗體組合需要考慮目的抗原的含量,樣本中含量低的指標優(yōu)先選擇熒光較強的熒光素。如果是分步加入熒光抗體,考慮到熒光的衰減,按照熒光素的強弱排序依次加入。

 

 

 

若有其他關于標記方面的問題,歡迎留言,我們的技術(shù)專家會及時與您溝通探討。

 

 

 

 

 

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